Evaluación de ensayos ultramicroanalíticos para la detección de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 / Evaluation of ultramicroanalytic assays to detect antibodies against SARS-CoV-2

Introducción: En el presente trabajo se muestran los resultados de la validación de los ensayos serológicos in vitro para la detección de anticuerpos IgM, IgG y anticuerpos totales contra el SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG desarrollados por el Centro de Inmunoensayo (CIE). Métodos: Se utilizaron paneles de muestras de suero de individuos negativos y de casos confirmados de COVID-19 para determinar el desempeño analítico de cada ensayo. Resultados: La especificidad clínica de los ensayos UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG fue del 100 por ciento en todos los ensayos y la especificidad analítica fue de 100 por ciento para los dos primeros ensayos y del 93,1 por cientopara el último. La sensibilidad clínica fue de 64,3, 80,8 y 97,5 por ciento, respectivamente. El valor predictivo positivo fue de 100 por ciento en todos los ensayos, en tanto que el negativo osciló entre 83,3 y 95,2 por ciento. La concordancia fluctuó entre 92,4 y 96,9 por ciento y el índice kappa de todos los ensayos fue muy bueno. La sensibilidad de los ensayos se incrementó a 82,76, 96,5 y 100 por ciento, respectivamente, en las muestras de suero colectadas con más de 14 días de iniciado el cuadro clínico. Conclusiones: Los ensayos demostraron una elevada sensibilidad y especificidad, lo que permite contar con herramientas basadas en una tecnología desarrollada en Cuba que posibilita la realización de estudios serológicos, vigilancia epidemiológica y de otro tipo, incluyendo los relacionados con vacunas en una plataforma con amplia distribución nacional(AU)

Introduction: This paper shows the results obtained in the validation of in vitro serological assays to detect IgM, IgG antibodies, and total antibodies against SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG developed by the Immunoassay Center. Methods: Panels of serum samples from negative and COVID-19 confirmed patients were used to determine the analytical performance of each assay. Results: UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG assays demonstrated 100 percent clinical specificity for all assays; and 100 percent analytical specificity for the first two assays, and 93.1 percent for the last one. Clinical sensitivity was 64.3 percent, 80.8 percent and 97.5 percent, respectively. The positive predictive value was 100 percent in all assays, while the negative predictive value ranged from 83.3 percent to 95.2 percent. Concordance varied from 92.4 percent to 96.9 percent, and kappa index in every assay was very good. Assays sensitivity increased to 82.7 percent, 96.5 percent and 100 percent, respectively for serum samples collected more than 14 days after onset of the symptoms. Conclusions: The assays demonstrated high sensitivity and specificity, which allows us to have Cuban technology-based tools for serological, epidemiological surveillance, and other types of studies, including those related to vaccines on a platform with wide national distribution(AU)

Vigilancia de laboratorio de dengue y otros arbovirus en Cuba, 1970-2017 / Laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in Cuba, 1970-2017

Los arbovirus constituyen una de las principales causas de emergencia en salud por la morbilidad y mortalidad que producen y el estrés sanitario que conllevan. Cuba no ha estado excenta de riesgo, y el enfrentamiento del dengue inicialmente y de otros arbovirus después, ha sido, y es, una prioridad de las máximas autoridades del país. La vigilancia de laboratorio de dengue se estableció desde inicios de la década del 70 aunque sus objetivos y estrategias han cambiado según la situación epidemiológica nacional y regional y la tecnología de diagnóstico disponible. Se destacan cuatro etapas en su desarrollo. En este trabajo se resumen las estrategias desarrolladas para la vigilancia de laboratorio de dengue y de otros arbovirus en el periodo de 1970 a 2017. Se describe además el papel desempeñado por el Instituto de Medicina Tropical, ¨Pedro Kouri¨ (IPK) como Laboratorio Nacional de Referencia(AU)

Arboviruses are one of the leading causes of health emergencies due to their morbidity and mortality and the sanitary stress they bring about. Cuba has not been free from risk, and the response first to dengue fever and then to other arboviruses has been and still is a priority for the country's top authorities. Laboratory surveillance of dengue fever was implemented in the 1970s, though its aims and strategies have evolved in keeping with the national and regional epidemiological situation, and the available diagnostic technology. Four stages stand out in the development of dengue laboratory surveillance. The present paper summarizes the strategies developed for laboratory surveillance of dengue fever and other arboviruses in the period 1970-2017. A description is also provided of the role played by Pedro Kourí Tropical Medicine Institute (IPK) as a national reference laboratory(AU)

Sociedad, economía, inequidades y dengue / Society, economy, inequities and dengue

Se analizó la situación en la región de las Américas acerca de la reemergencia del dengue y la emergencia de su forma severa, el dengue hemorrágico, que continúa siendo un problema con una tendencia al incremento a partir de la década de los 90, con el mayor número de casos en 2002 (más de 1 000 000 de enfermos). Se discutieron los factores que determinaron la emergencia de la enfermedad, haciendo énfasis en los factores socioeconómicos, entre los que se encuentran la pobreza y las iniquidades, las migraciones y el acceso a los servicios básicos de la población, como los de mayor preponderancia en el mantenimiento de la enfermedad en la mayoría de los países. Se analizaron también los principios básicos para el control del vector como única solución viable hoy día para controlar la enfermedad y la necesidad de la voluntad política, la intersectorialidad, la participación de toda la comunidad y el fortalecimiento de la legislación sanitaria en el control, al no disponer aún de una vacuna segura y accesible.

Dengue and dengue hemorrhagic fever in the Americas have been on the rise throughout the 1990s, with the highest number over one million cases reported in 2002. This paper analyzed the situation of dengue in the region and discussed the determining factors that account for the rise of the disease, making emphasis on socioeconomic factors, such as poverty, inequality, migrations and the lack of access to basic services, which are the most influential in perpetuating this disease in most countries. Considering that a safe and accessible vaccine is now unavailable, basic principles of vector control combined with political willingness, inter-sectoral involvement, active community participation and the tightening of health legislation were also examined as the only viable solution at present.

Control externo de la calidad del diagnóstico serológico del dengue en laboratorios de países de las Américas, 1996-2001 / Quality control of the serological diagnosis of dengue in laboratories throughout the Americas, 1996-2001

Dar a conocer los resultados de cuatro controles externos de la calidad del diagnóstico serológico del dengue realizados en la Región de las Américas en el período de 1996- 2001 y presentar los resultados obtenidos por los laboratorios participantes. MÉTODOS: Se realizaron controles externos de la calidad del diagnóstico serológico del dengue en 1996-1997, 1998-1999, 1999-2000 y 2000-2001. Paneles compuestos por 20 sueros (12 de estos positivos a anticuerpos IgM contra el dengue) fueron enviados a laboratorios de la Región para que participaran en los controles realizados. Los sueros de los paneles eran negativos a anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana y el virus de la hepatitis C, así como al antígeno de superficie de la hepatitis B, y fueron almacenados a -20 °C hasta su envío en refrigeración a los laboratorios participantes. La presencia de anticuerpos IgM se determinó mediante un ensayo inmunoenzimático (ELISA) de captura, mientras que el título de anticuerpos IgG se determinó por inhibición de la hemoaglutinación o ELISA de IgG. Los resultados de la determinación de anticuerpos IgM contra el dengue que no coincidían con los del centro de referencia se consideraron discordantes. El título de anticuerpos IgG se consideró discordante cuando los resultados difirieron en dos diluciones o más con respecto al resultado del centro de referencia. RESULTADOS: Un total de 27 laboratorios recibió 59 paneles de sueros de 1996 a 2001, y se recibieron los resultados del análisis de 54 de esos paneles (91,5 por ciento). De 1 080 sueros (20 X 54), 95,6 por ciento coincidieron con el laboratorio de referencia en cuanto a los resultados de la detección de anticuerpos IgM contra el dengue. Además, en 47 paneles (87 por ciento) la coincidencia con el laboratorio de referencia se observó en 90 por ciento de las muestras del panel o más. De los 27 paneles para los cuales se recibieron los resultados de los títulos de anticuerpos IgG contra el dengue, 22 (81,5 por ciento) coincidieron con el centro de referencia. Tomando en conjunto los cuatro controles realizados, 22 laboratorios coincidieron con el centro de referencia en 90 por ciento de las muestras o más y 13 en 100 por ciento de las muestras en cuanto a la presencia de IgM. CONCLUSIONES: Los resultados indican que la mayoría de los laboratorios participantes mostraron un excelente desempeño en la detección de anticuerpos IgG e IgM contra el dengue. No obstante, las deficiencias encontradas ...

Enfermedades virales emergentes / Emerging viral diseases

En los últimos años se ha observado un incremento cada vez más creciente de nuevas enfermedades infecciosas o de otras que ya se consideraban controladas. Las llamadas enfermedades emergentes y reemergentes son aquellas infecciones nuevas que han aparecido en una población o que han existido pero están aumentando rápidamente en incidencia o rango geográfico. Factores sociales y económicos, de la atención médica, producción de alimentos, cambios en el comportamiento del hombre, cambios ambientales, deterioro de los sistemas de salud y adaptación y cambio de los microorganismos se relacionan con el surgimiento o resurgimiento de diferentes entidades. En este trabajo se presentó un análisis de la emergencia y reemergencia de las enfermedades virales y de los factores que han influido en esta situación

Dengue en Panamá, 1993 / Dengue in Panama, 1993

Hasta 1993, Panamá era el único país de Centroamérica que había detectado transmisión autóctona de virus dengue sin experimentar una epidemia explosiva, pese a estar reinfestado con el mosquito Aedes aegypti desde 1985. En este trabajo se describen las características de este primer brote reportado el 19 de noviembre de 1993 y se demuestra que las epidemias se presentan a pesar de mantener un Programa de Vigilancia y Control para Dengue -que contempla bajos niveles de infestación del Aedes aegypti y un sistema de detección temprano del virus- si la comunidad no participa activamente como ocurrió posteriormente durante 1994, 1995 y 1996. Los 14 casos reportados se localizaron en un área bajo la responsabilidad del Centro de Salud de San Isidro, en el corregimiento Belisario Porras, Distrito Especial de San Miguelito, en la Ciudad de Panamá (13 caso en 4 manzanas del sector de Santa Librada y 1 caso en el Valle de San Isidro). Tres pacientes eran menores de 15 años y 8 eran mayores de 36 años, la edad de los restantes fluctúo entre 15 y 24 años, 9 eran del sexo femenino. En 3 pacientes se aisló el virus dengue tipo 2. En otros 11 se demostró la presencia de anticuerpos IgM e IgG para dengue. En 8 mayores de 20 años, se observó una respuesta de tipo secundaria. De acuerdo con el cuadro clínico, la epidemia se clasificó como de fiebre del dengue. La encuesta seroepidemiológica realizada en el sector de Santa Librada y sus alrededores, 5 meses después del inicio de los síntomas del primer caso, demostró una prevalencia de anticuerpos para dengue de 5,7 por ciento (46/802), principalmente en individuos mayores de 44 años de edad. Estos resultados confirmaron que el brote estuvo limitado geográficamente

Normalización de técnicas inmunohistoquímicas para la detección de antígenos del virus dengue en tejidos embebidos en parafina / Standarization of immunohistochemical techniques for the detection of dengue virus antigens in paraffin-embedded tissues

Las técnicas inmunohistoquímicas (IHQ) pueden ser de gran utilidad para la detección de antígenos del virus del dengue en tejidos infectados. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos con el empleo de 2 métodos IHQ: uno directo y otro indirecto amplificado con un anticuerpo universal biotinilado y un sistema estreptavidina peroxidasa (LSAB) (en ambos se utiliza la enzima peroxidasa). Estos métodos fueron aplicados en tejidos embebidos en parafina procedentes de ratones inoculados intracerebralmente con el virus del dengue. El objetivo es contar con una técnica en el laboratorio que permita identificar estos antígenos en los tejidos para ser aplicados en el diagnóstico y los estudios relacionados con la obtención de inmunógenos

Vigilancia de las encefalitis de San Luis, equina del este y equina del oeste en la provincia Ciego de Avila / Surveillance of St. Louis, Eastern equine, and Wester equine encephalitis in the province of Ciego de Avila

Se realizaron estudios serologicos utilizando las tecnicas de inhibicion de la hemaglutinacion y neutralizacion con el objetivo de conocer la dinamica de circulacion de algunos Arbovirus, con el empleo de los antigenos de encefalitis equina del este, equina del oeste y San Luis en sueros humanos de personas sanas y sintomaticas, asi como de aves centinelas, en el periodo de 1987 a 1991 y durante el ano 1994. El 1,7 por ciento de las personas asintomaticas testadas presentaron anticuerpos neutralizantes a equina del este y un 4,8 por ciento a encefalitis de San Luis. Se detectaron 16 pacientes con seroconversion por inhibicion de la hemaglutinacion al virus de San Luis. La vigilancia con aves centinelas demostro que durante los anos 1988, 1989 y 1994 circulo San Luis en los municipios de Moron, Bolivia y Chambas, mientra que en este ultimo municipio en los anos 1988 y 1989 circulo la encefalitis equina del este. Se detectaron en personas sanas anticuerpos heterologos, ya que no hubo presencia de anticuerpos neutralizantes contra este virus

Secuenciacion directa de un producto amplificado de una muestra de suero / Direct sequence of an amplified product from a serum sample

Se reporta la secuencia nucleotida y aminoacidica de una zona de gran variabilidad en el genoma del virus dengue 2 a partir del ARN del virus original sin pase en ningun sistema de aislamiento y se compara con la primera cepa de dengue 2 aislada durante la epidemia de 1981 con 4 pases en raton lactante. Los resultados demuestran que la secuencia nucleotidica del suero y de la cepa A15 son iguales

Ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos monoclonales contra las proteínas E y NS1 del virus dengue

Se estandarizó un ELISA para la detección de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue. Se aplicó un ELISA indirecto utilizando como fuente de antígeno células C6/36 inoculadas con la cepa A-15 aislada durante la epidemia de dengue 2 en 1981. Estas células fueron fijadas en placas ELISA a una concentración de 200 000 células/pozo. Se utilizó un control celular en condiciones similares. Para normalizar el sistema se emplearon anticuerpos monoclonales específicos a ambas proteínas. Se realizaron estudios a diferentes tiempos de incubación para determinar el momento de mayor expresión de estas proteínas en la membrana celular. Los resultados muestran una respuesta máxima a las 72 horas posinoculación para ambas proteínas, se obtuvo una sensibilidad para la detección de NS1 de 14,7 ng/mL y para la E de 1,43 ng/mL. Este sistema permite el tamizaje primario de anticuerpos monoclonales a las proteínas E y NS1 del virus dengue 2.

Neuropatia epidemica cubana. Parte I. Aislamiento viral / Cuban epidemic neuropathy. Part I. Viral isolation

Desde finales de 1991 junio de 1993 se produjo la epidemia de neuropatia que afecto a 50 963 personas. Se presentaron 2 formas clinicas de la enfermedad: la forma optica (con o sin manifestaciones perifericas, 52 por ciento de los casos) y la periferica (48 por ciento). Los estudios epidemiologicos pusieron de manifiesto trastornos nutricionales, fundamentalmente deficit de vitaminas del complejo B dados por las dificultades economicas del pais en el "periodo especial". Se identificaron el habito de fumar y la ingestion de bebidas alcoholicas como factores de riesgo, en particular para las formas mas severas de la enfermedad. En los estudios virologicos de liquido cefalorraquideo (LCR) se obtuvo aislamiento en celulas Vero de virus Coxsackie A9 en el 4 por ciento y de otro agente de efecto citopatogenico ligero en el 80 por ciento de las muestras. El 67 por ciento de las muestras de LCR inoculadas en ratones lactantes produjo enfermedad o muerte de los animales. Se comprobo la persistencia viral en el LCR por un tiempo de al menos 21 dias en un grupo de pacientes y de 1 ano en otro

Utilización de las técnicas ELISA e inmunofluorescencia indirecta para la detección rápida de la encefalomielitis equina del este / Use of ELISA and indirect immunofluorescence techniques for the rapid detection of Eastern equine encephalomyelitis

Se muestran los resultados obtenidos de la utilización de un ElISA de doble anticuerpo y el método de inmunofluorescencia indirecta para la identificación de aislamientos del virus de la encefalomielitis equina del este realizados en los sitemas celulares Vero XL-1. Los resultados obtenidos mediante ambas técnicas fueron del 100 por ciento de coincidencia con la identificación por neutralización. Utilizando las primeras se pudo detectar el virus entre 6 y 8 horas posinoculación. Los resultados obtenidos utilizandon las células XL-2 fueron mejores que con las células Vero

Actividad de picada diurna y densidad estacional de Lutzomyia (c) orestes (Diptera: Psychodidae) / Daily biting activity and seasonal density of Lutzomyis (c) orestes (Diptera: Psychodidae

La actividad de picada diurna y la densidad estacional de Lutzomya (c) orestes fue registrada mediante la técnica de cebo humano en la cueva Don Martín, al oeste de la provincia La Habana, en el transcurso de 1 año. Se realizó el test de matriz de correlación entre la densidad, temperatura, humedad relativa y precipitaciones